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人糖磷脂酰肌醇ELISA检测澳门威尼斯人注册网站的技术原理
浏览次数:730发布日期:2015/1/4
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人糖磷脂酰肌醇ELISA检测澳门威尼斯人注册网站

GPI澳门威尼斯人注册网站是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知GPI浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将GPI和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中GPI的浓度呈比例关系。

操作注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应马上放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,汲取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀澳门威尼斯人注册网站里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应马上读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不马上使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人糖磷脂酰肌醇ELISA检测澳门威尼斯人注册网站操作步骤
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。马上加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应马上测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

人糖磷脂酰肌醇ELISA检测澳门威尼斯人注册网站结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的GPI标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的GPI含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围:0-240umol/L

4、敏感度: 0.1 umol/L

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