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人α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA澳门威尼斯人注册网站使用说明书
浏览次数:53发布日期:2022/5/5
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本澳门威尼斯人注册网站仅供研究使用。


产品名称:

通用名:人α-银环蛇毒素(α-BGT)酶联免疫分析澳门威尼斯人注册网站


使用目的:

本澳门威尼斯人注册网站用于测定人血清,血浆及相关液体样本中α-银环蛇毒素(α-BGT)含量。


人α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA澳门威尼斯人注册网站实验原理

本澳门威尼斯人注册网站应用间接法测定标本中人α-银环蛇毒素(α-BGT)水平。用纯化的人α-银环蛇毒素(α-BGT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的α-银环蛇毒素(α-BGT)标准品和未知浓度的α-BGT待检样品,温育后,加入生-物-素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-银环蛇毒素(α-BGT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人α-银环蛇毒素(α-BGT)浓度。 


澳门威尼斯人注册网站组成 

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标本要求 

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融


操作步骤

1.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。

5. 加生-物-素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生-物-素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6. 洗涤:操作同4。

7.加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

8. 洗涤:操作同4。

9.显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 


人α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA澳门威尼斯人注册网站注意事项

1.澳门威尼斯人注册网站从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.  如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。


线形范围:

10ng/L-200ng/L


规格:

96人份/盒


保存条件及有效期

1.澳门威尼斯人注册网站保存:2-8℃。

2.有效期:6个月


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