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小鼠莱姆病(Lyme-D)ELISA澳门威尼斯人注册网站使用说明书
浏览次数:69发布日期:2021/10/21
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小鼠莱姆病(Lyme-D)ELISA澳门威尼斯人注册网站使用说明书

本澳门威尼斯人注册网站仅供研究使用。


检测范围:  96T                                                        

1.6IU/L -70IU/L

                                                                 

使用目的:

本澳门威尼斯人注册网站用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中莱姆病(Lyme-D)表达。


实验原理

本澳门威尼斯人注册网站应用双抗体夹心法测定标本中小鼠莱姆病(Lyme-D)表达。用纯化的小鼠莱姆病(Lyme-D)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中莱姆病(Lyme-D)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的莱姆病(Lyme-D)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中小鼠莱姆病(Lyme-D)的存在与否。


澳门威尼斯人注册网站组成 

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小鼠莱姆病(Lyme-D)ELISA澳门威尼斯人注册网站标本要求 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤

1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


操作程序总结:

3.png


计算和结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为莱姆病(Lyme-D)阴性

阳性判定:样品OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为莱姆病(Lyme-D)阳性。 


小鼠莱姆病(Lyme-D)ELISA澳门威尼斯人注册网站注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.澳门威尼斯人注册网站从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。


保存条件及有效期

1.澳门威尼斯人注册网站保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

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