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收到细胞后正确处理的操作方法
浏览次数:101发布日期:2021-10-09

大家在收到细胞株包裹时,需要如何操作呢?首先大家需要仔细检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请马上通知。细胞株需尽速开始培养,或马上冷冻保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。


冷冻细胞解冻程序:

细胞培养

①依据细胞株数据单zhi定之基础培养基种类、血清种类和其它zhi定之成份和比例,制备培养基。绝大多数之细胞均无法马上适应不同之基础培养基或不同之血清种类,若因实验需要,必须有所不同时,务必以缓慢比例渐次改变培养基组成,确定细胞适应后,方进行所需之实验。


②FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单zhi定之血清种类培养之。


③将培养基置于37 °C 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,马上放入37 °C 水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后,以70%ethanol擦拭冷冻管外部,移入无菌操作台。


④依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25或T75 flask 内之培养基,混合均匀,放入37 °C,5 % CO2培养箱培养。


⑤对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活化有不良影响,不需立即由解冻.细胞中去除,待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。


有少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞,需马上去除DMSO者,则可将解冻后之细胞悬浮液放入5-10 ml培养基中,离心300 xg (约1000rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,将细胞均匀混合后,转移至培养瓶中,再放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。



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