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应用猪6酮前列腺素酶联免疫说明书
浏览次数:1088发布日期:2015-03-31

                  猪6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)酶联免疫分析
澳门威尼斯人注册网站使用说明书
本澳门威尼斯人注册网站仅供研究使用。
检测范围:                                                          96T
2ng/mL -80ng/mL

使用目的:
本澳门威尼斯人注册网站用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)含量。
实验原理
本澳门威尼斯人注册网站应用双抗体夹心法测定标本中猪6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平。用纯化的猪6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a),再与HRP标记的6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猪6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)浓度。 
澳门威尼斯人注册网站组成 
1    30倍浓缩洗涤液    20ml×1瓶    7    终止液    6ml×1瓶
2    酶标试剂    6ml×1瓶    8    标准品(160ng/mL)    0.5ml×1瓶
3    酶标包被板    12孔×8条    9    标准品稀释液    1.5ml×1瓶
4    样品稀释液    6ml×1瓶    10    说明书    1份
5    显色剂A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2张  
6    显色剂B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1个
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本澳门威尼斯人注册网站提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80ng/mL    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40ng/mL    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20ng/mL    3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10ng/mL    2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5ng/mL    1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液


2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结:


计算
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 
注意事项
1.澳门威尼斯人注册网站从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推选使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.澳门威尼斯人注册网站保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

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