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鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析澳门威尼斯人注册网站操作步骤
浏览次数:77发布日期:2022-06-21

鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析澳门威尼斯人注册网站操作步骤


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本澳门威尼斯人注册网站仅供研究使用。


实验原理  

本澳门威尼斯人注册网站应用双抗原夹心法测定标本中鸡免疫球蛋白Y(IgY)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白Y(IgY),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白Y(IgY)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡免疫球蛋白Y(IgY)浓度。


鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析澳门威尼斯人注册网站组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(40μg/ml)0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个


鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析澳门威尼斯人注册网站操作步骤标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


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1.标准品的稀释:本澳门威尼斯人注册网站提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

20μg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

5μg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

2.5μg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1.25μg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。



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